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微球包被常用阻断剂

发表时间:2021-04-18 13:43

阻断剂

微球包被后,通常将封闭剂(通过吸附)包被在微球上。使用溶解在存储缓冲液中的物质将阻止聚合物微球暴露疏水表面,将减少微球的非特异性结合和自聚集。这些化合物也用于使包被的微球与样品中的非目标分子之间的非特异性相互作用(例如蛋白质与聚合物表面之间的疏水相互作用)最小化。应当仔细选择封闭剂,以确保其有效地减少非特异性相互作用;某些阻断剂可能会干扰测试/测定,或实际上有助于非特异性结合。应该评估阻断剂的浓度,以确保充分的阻断(尤其是根据捕获分子的包被水平),而又没有明显的活性损失。阻断剂通常以不同的量添加到存储缓冲液中,标准浓度为0.05%至0.1%(w / v)。在储存之前,也建议在较高浓度的阻断剂(最高1%)中单独孵育,以使微球暴露的表面饱和。

一些常用的阻断剂如下:

1.BSA(牛血清白蛋白):通常单独使用,但可以与其他阻断剂(最常见的是表面活性剂)结合使用。

2.酪蛋白:含有天然生物素的乳基蛋白质,在使用涉及生物素的系统时应避免使用以防止干扰。

3.消化酶(酪蛋白酶水解产物):酪蛋白的酶衍生物,在使用涉及生物素的系统时也应避免使用。

4.非离子表面活性剂:典型的为Tween®20和Trition™X-100。

与其他阻滞剂组合使用时,常见比例为1%阻滞剂; 0.05%表面活性剂。

5.“无关的”IgG:通常在将特异性IgG与微球结合时使用。 例如,如果偶联小鼠IgG,则兔子(或任何非交叉反应的IgG)可以被吸附为阻断剂。

6.FSG(鱼皮明胶):也可以使用纯明胶或明胶水解产物。

7.聚乙二醇:一种用途广泛的阻滞剂,有多种尺寸,构造和规格可供选择。

8.血清:非交叉反应的血清,例如马或鱼的血清,与各种抗体的交叉反应性非常惰性。

9.商业性阻断剂:许多公司提供的制剂是由两种或更多种分子量不同的单一阻断物质组成的混合物,可在多种条件下有效使用。

还有许多其他方法,我们建议您在优化应用程序时尝试各种浓度的阻断剂和组合物。


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