微球包被常用缓冲液

缓冲液

以下是吸附方案中常用缓冲液的一些基本配方。 通常，最大吸附发生在蛋白质的pI处或附近，因此应相应地选择缓冲液。 另外，许多研究人员报告说，以大约0.15 M的生理浓度向耦合缓冲液中添加NaCl可以提高吸附效率。 此信息仅作为一般指南。 可以根据您的应用需求随意替换缓冲液和/或调整浓度。

1.    概述

对于微球吸附方案中常用缓冲液的一些基本配方，通常，最大吸附发生在蛋白质的pI处或附近，因此应相应地选择缓冲液。 另外，许多研究人员报告说，以大约0.15 M的生理浓度向耦合缓冲液中添加NaCl可以提高吸附效率。 此信息仅作为一般指南。 可以根据您的应用需求随意替换缓冲液和/或调整浓度。

也有许多缓冲液已成功用于共价偶联反应。通常方案不包含针对特定缓冲液的建议，因为没有一个缓冲液适合每种情况（配体和反应性基团）。通常，发生每个反应（激活，结合，淬灭，阻断）的pH值很重要； 当然缓冲液与配体的相容性（溶解性，活性）也很重要，在选择缓冲液时应考虑在内。

此外，缓冲液中不应包含会干扰或竞争反应或配体的某些化合物，例如磷酸盐和乙酸盐缓冲液会降低碳二亚胺的反应性，因此不建议在与COOH微球改性偶联时用作活化缓冲液。 在这种情况下，一种常用的替代方法是用MES缓冲液。同样，在与胺反应性化学物质工作时，应避免使用含游离胺的缓冲液，例如Tris或甘氨酸。

2.    通用缓冲液的配方

下面提供了常见生物缓冲液（包括配方）的列表。 离子强度应适当调整（偶合反应通常为〜25-100mM）。 请注意，列表仅为常见生物缓冲液，建议研究人员参考文献并尝试使用不同的缓冲液。

（1）磷酸盐缓冲盐水（PBS）； pH值7.4

磷酸氢二钾：1.82 g / L（MW 174.2）

磷酸二氢钠：0.22 g / L（MW 120.0）

氯化钠：8.76 g / L（MW 58.4）

使用去离子水使体积达到1L。 调节pH至7.4（使用1 N HCl或1 N NaOH）。

（2）硼酸盐缓冲液； pH值8.5

a.硼酸H3BO3：12.4 g / L（MW61.8）

b.四硼酸钠：19.1 g / L（MW 381.4）

将50mL（a）加入14.5mL（b）。用去离子水使体积达到200mL。 使用3 M NaOH将pH调节至8.5。

（3）醋酸缓冲液； pH范围3.6至5.6

a.0.1 M乙酸：（5.8mL制成1000mL）

b.0.1 M乙酸钠：8.2 g / L（无水; MW 82.0）

按指示的比例混合乙酸和乙酸钠溶液，并用去离子水将最终体积调节至100mL。 使用1N HCl或1NNaOH调节pH。

（4）柠檬酸磷酸盐缓冲液； pH范围2.6至7.0

a.0.1 M柠檬酸：19.2 g / L（MW 192.1）

b.0.2 M磷酸氢二钠：35.6 g / L（二水合物; MW 178.0）

按照指示的比例混合柠檬酸和磷酸钠溶液，并用去离子水将体积调节至100mL。 使用1N HCl或1NNaOH调节最终pH。

（5）碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液； pH范围9.2至10.4

a.0.1 M碳酸钠：10.6 g / L（无水; MW 106.0）

b.0.1 M碳酸氢钠：8.4 g / L（MW 84.0）

按指示的比例混合碳酸钠和碳酸氢钠溶液，并用去离子水将体积调节至200mL。 使用1 N HCl或1 NNaOH调节最终pH。

（6）MES缓冲液； pH范围5.7至7.2

•将19.2g MES游离酸（MW 195.2）溶解在约900mL的纯水中。 用1 N HCl或1N NaOH滴定至所需的pH，并用纯水将最终体积调节至1000mL。

1.    抗菌剂

通常将低浓度（0.05-0.1％）的抗菌剂（例如叠氮化钠或硫醇盐）添加到存储缓冲液中，特别是对于长期存储。应谨慎选择抗菌剂，因为它们可能表现出不同的稳定性，涉及特殊的处置注意事项等。例如，叠氮化钠可能与铅和铜管反应生成爆炸性金属叠氮化物。 因此，在处理时，必须使用大量的水冲洗管道并防止叠氮化物积聚。