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微球包被常用缓冲液

发表时间:2021-04-18 13:34

缓冲液

以下是吸附方案中常用缓冲液的一些基本配方。 通常,最大吸附发生在蛋白质的pI处或附近,因此应相应地选择缓冲液。 另外,许多研究人员报告说,以大约0.15 M的生理浓度向耦合缓冲液中添加NaCl可以提高吸附效率。 此信息仅作为一般指南。 可以根据您的应用需求随意替换缓冲液和/或调整浓度。

1.    概述

对于微球吸附方案中常用缓冲液的一些基本配方,通常,最大吸附发生在蛋白质的pI处或附近,因此应相应地选择缓冲液。 另外,许多研究人员报告说,以大约0.15 M的生理浓度向耦合缓冲液中添加NaCl可以提高吸附效率。 此信息仅作为一般指南。 可以根据您的应用需求随意替换缓冲液和/或调整浓度。

也有许多缓冲液已成功用于共价偶联反应。通常方案不包含针对特定缓冲液的建议,因为没有一个缓冲液适合每种情况(配体和反应性基团)。通常,发生每个反应(激活,结合,淬灭,阻断)的pH值很重要; 当然缓冲液与配体的相容性(溶解性,活性)也很重要,在选择缓冲液时应考虑在内。

此外,缓冲液中不应包含会干扰或竞争反应或配体的某些化合物,例如磷酸盐和乙酸盐缓冲液会降低碳二亚胺的反应性,因此不建议在与COOH微球改性偶联时用作活化缓冲液。 在这种情况下,一种常用的替代方法是用MES缓冲液。同样,在与胺反应性化学物质工作时,应避免使用含游离胺的缓冲液,例如Tris或甘氨酸。

2.    通用缓冲液的配方

下面提供了常见生物缓冲液(包括配方)的列表。 离子强度应适当调整(偶合反应通常为〜25-100mM)。 请注意,列表仅为常见生物缓冲液,建议研究人员参考文献并尝试使用不同的缓冲液。

(1)磷酸盐缓冲盐水(PBS); pH值7.4

磷酸氢二钾:1.82 g / L(MW 174.2)

磷酸二氢钠:0.22 g / L(MW 120.0)

氯化钠:8.76 g / L(MW 58.4)

使用去离子水使体积达到1L。 调节pH至7.4(使用1 N HCl或1 N NaOH)。

(2)硼酸盐缓冲液; pH值8.5

a.硼酸H3BO3:12.4 g / L(MW61.8)

b.四硼酸钠:19.1 g / L(MW 381.4)

将50mL(a)加入14.5mL(b)。用去离子水使体积达到200mL。 使用3 M NaOH将pH调节至8.5。

(3)醋酸缓冲液; pH范围3.6至5.6

a.0.1 M乙酸:(5.8mL制成1000mL)

b.0.1 M乙酸钠:8.2 g / L(无水; MW 82.0)

按指示的比例混合乙酸和乙酸钠溶液,并用去离子水将最终体积调节至100mL。 使用1N HCl或1NNaOH调节pH。

mL Acetic Acid

46.3

41.0

30.5

20.0

14.8

10.5

4.8

mL of Na Acetate

3.7

9.0

19.5

30.0

35.2

39.5

45.2

pH

3.6

4.0

4.4

4.8

5.0

5.2

5.6

(4)柠檬酸磷酸盐缓冲液; pH范围2.6至7.0

a.0.1 M柠檬酸:19.2 g / L(MW 192.1)

b.0.2 M磷酸氢二钠:35.6 g / L(二水合物; MW 178.0)

按照指示的比例混合柠檬酸和磷酸钠溶液,并用去离子水将体积调节至100mL。 使用1N HCl或1NNaOH调节最终pH。

mL Citric Acid

44.6

35.9

29.4

24.3

19.7

13.6

6.5

mL of Na Phosphate

5.4

14.1

20.6

25.7

30.3

36.4

43.6

pH

2.6

3.4

4.2

5.0

5.8

6.6

7.0

(5)碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液; pH范围9.2至10.4

a.0.1 M碳酸钠:10.6 g / L(无水; MW 106.0)

b.0.1 M碳酸氢钠:8.4 g / L(MW 84.0)

按指示的比例混合碳酸钠和碳酸氢钠溶液,并用去离子水将体积调节至200mL。 使用1 N HCl或1 NNaOH调节最终pH。

mL Na Carbonate

4.0

9.5

16.0

22.0

27.5

33.0

38.5

mL of Na Bicarbonate

46.0

40.5

34.0

28.0

22.5

17.0

11.5

pH

9.2

9.4

9.6

9.8

10.0

10.2

10.4

(6)MES缓冲液; pH范围5.7至7.2

•将19.2g MES游离酸(MW 195.2)溶解在约900mL的纯水中。 用1 N HCl或1N NaOH滴定至所需的pH,并用纯水将最终体积调节至1000mL。

1.    抗菌剂

通常将低浓度(0.05-0.1%)的抗菌剂(例如叠氮化钠或硫醇盐)添加到存储缓冲液中,特别是对于长期存储。应谨慎选择抗菌剂,因为它们可能表现出不同的稳定性,涉及特殊的处置注意事项等。例如,叠氮化钠可能与铅和铜管反应生成爆炸性金属叠氮化物。 因此,在处理时,必须使用大量的水冲洗管道并防止叠氮化物积聚。



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