免疫层析技术（以双抗体夹心法检测为例）

双抗体夹心法检测原理是：首先将能够结合同一抗原的一对抗体分别固定于免疫层析检测试纸条的检测线（T线）与结合垫上，结合垫上的抗体带有显色标记（荧光标记、胶体金标记或彩色微球标记）。在试纸条滴样处滴加样品，样品会向试纸条另一端流动，当流动至结合垫，样品中的抗原会与结合垫上的标记抗体结合，形成“标记抗体-抗原”复合物；当样品流动至检测线时，抗原会被T线上的抗体捕获，形成“标记抗体-抗原-捕获抗体”复合物，随着T线上捕获抗原的不断增加，T线会出现愈加明显的颜色变化。C线处固定了二抗，无论样品中是否含有待测抗原都会显色。所以如果T线出现颜色变化，则说明待测样本中含有待测抗原。

时间分辨荧光免疫分析是目前与化学发光、电化学发光并驾齐驱的三种超敏免疫分析方法之一。其原理是采用较长荧光半衰期的稀土离子作标记物，由于这种标记物Stokes位移大(＞150nm)且荧光寿命比本底物质荧光寿命高5～6个数量级，因此，测定时只要延缓测量时间，待本底物质的荧光充分衰减后再测定标记物的信号就可有效地消除各种非特异性荧光的干扰，获得很高的灵敏度。

时间分辨荧光微球(Time Resolved Fluorescent)作为一种特殊的功能微球，每个微球中可包裹成千上万个荧光分子，大大提高了荧光的标记效率，有效提高了分析灵敏度；同时荧光微球表面修饰有合适密度的羧基或其它功能基团，用于与蛋白或抗体的共价偶联，提高标记物的稳定性。更为重要的是由于微球包埋的稀土离子已经过了螯合，无需解离增强步骤，因此从根本上解决了传统的DELFIA法只能在液相中而不能在固相界面反应的问题，从而解决了将时间分辨荧光应用于免疫层析平台的技术瓶颈，在此基础上可开发出灵敏度高于普通胶体金或有色乳胶免疫层析方法1-3个数量级的定量检测技术。时间分辨荧光微球（TRFN）同荧光微球（FM）、胶体金（CG）、量子点（QD）标记的模拟检测对比如下：