乳胶微球的使用说明

表面特性

即使颗粒表面带电，疏水性胶乳也会与任何疏水性分子牢固结合，包括蛋白质，核酸和许多小生物分子，例如药物和激素。

疏水性乳胶产品通常在不含生物分子的系统中稳定。但是，在生物系统中，包括在免疫测定中的应用，微球很容易被各种蛋白质或多糖包被，大大降低了它们非特异性吸收生物分子的能力。

蛋白质分子（如抗生物素蛋白，链霉亲和素和抗体）的特定不可逆吸附是通过简单地将乳胶和蛋白质混合在一起一段指定的时间，然后通过离心和去除上清液将结合的蛋白质与未结合的蛋白质分离而实现的。

为了减少非特异性结合，在颗粒上涂覆BSA或dextrans。 为了进一步减少非特异性结合，将蛋白质，核酸和其他生物分子共价偶联到颗粒上。

共价偶联比被动吸附需要更多的努力，但是可以产生特异性更高的结合物，并保持更长的活性。碳二亚胺介导的CML乳胶偶联是选择结合低分子量肽和寡核苷酸的方法。

选择合适的缓冲液

使用乳胶微球时，选择正确的缓冲液至关重要。选择缓冲液时，请考虑以下几点：

l   缓冲液的选择取决于表面电荷基团的类型，大小和密度。

l   较小的颗粒通常具有较少的表面电荷基团来稳定，并且需要更严格的条件来防止聚集。

l   使用硫酸盐，羧基或CML（带负电荷）的乳胶颗粒时，应避免使用Tris等阳离子缓冲液。带负电的颗粒也对低浓度的多价阳离子（例如Ca ++和Mg ++盐）敏感，如果可能，应避免使用包含这些阳离子的缓冲液。如果实验需要多价阳离子缓冲液，那么对Ca ++和Mg ++离子不那么敏感的阳离子乳胶颗粒是更好的选择。

l   使用阳离子（am和AML）乳胶颗粒时，避免使用磷酸盐或硼酸盐缓冲液。

l   缓冲液的离子强度应保持尽可能低的水平，尤其是当颗粒非常小或电荷密度较低时。

l   颗粒应在pH> 5.0的条件下使用。如果不遵循这些条件，则电荷基团可能被中和，从而导致聚集。如果确实发生聚集，通常可以通过将pH值调整到正确的范围，然后进行轻柔的超声处理，使颗粒重新分散。

l   缓冲液制备中使用的水应尽可能纯净，以防止疏水性颗粒清除杂质。

控制蛋白质的非特异性结合

非特异性结合可能是使用乳胶颗粒时遇到的最常见问题-这通常是放弃原本构思良好的实验的主要原因。

胶乳颗粒通常是疏水的，尽管各种改性趋向于使其变小，但由于它们是基于聚苯乙烯的，所以颗粒始终保持某些疏水性。在生物系统中，大多数非特异性结合问题是疏水相互作用的结果。 但是，一些问题也可能是由基于电荷的相互作用引起的，例如带正电荷的分子与带负电荷的胶乳表面结合。

最小化这些非特异性结合的最佳方法：

l   用大分子（例如蛋白质或多糖）包被颗粒，该大分子通过封闭颗粒表面上的疏水或带电结合位点来减少非特异性结合。尽管可以使用多种类型的封闭剂，但最常用的是BSA，卵清蛋白和全血清。 在生物素-亲和素系统中应避免卵白蛋白。

l   当使用疏水性乳胶时，以250-500 µg /ml乳胶悬浮液的浓度添加所需蛋白质，其浓度在0.5％至2.0％固体之间。

l   dextran（40k MW，2％w / v）可用作蛋白质的替代品或补充剂。 与蛋白质不同，dextran可逆地结合到乳胶微球上，在表面上形成一层更加亲水的环境并减少非特异性相互作用。 当使用亲水性CML颗粒时，封闭剂可能不会牢固结合。 在这种情况下，共价偶联蛋白质可以解决该问题。

l   可以将特异性结合蛋白（例如免疫球蛋白或抗生物素蛋白）与BSA混合并同时共价偶联，从而形成具有共价结合BSA涂层的特异性活性胶乳。在可接受去污剂的情况下，可以将非离子表面活性剂（例如Triton X-100或Tween 80）以0.01至0.1％的浓度涂覆在颗粒上。对于每种应用，应通过实验确定确切的浓度。